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檢驗專業考試臨床檢驗基礎知識篇一

為了幫助考生系統的復習2017年檢驗專業考試課程，全面的了解檢驗專業考試考試教材的相關重點，為此應屆畢業生考試網小編特編輯整理了2017年檢驗專業考試臨床檢驗基礎精選，希望對您參加本次考試有所幫助!

小吞噬細胞的運動可以分成隨機運動和定向運動，前者類似于布朗運動。檢測方法是將采集的白細胞懸液滴于玻片上，用光學顯微鏡直接觀察其運動。也可用毛細血管法將細胞懸液裝入硅化毛細血管中，稍加離心，使細胞沉積在一端，切去無細胞的毛細血管段，繼而移放在含細胞培養液的培養小瓶中，37℃溫育18～20h，游動的細胞將從毛細血管內外移，在管口形成一細胞團，根據細胞面積可判斷受檢中性粒細胞活動的強弱。某些患者中性粒細胞的任意運動明顯減弱，甚至消失。中性粒細胞的定向運動表現為趨化運動，測定方法有多種，其原理相同，而方法大同小異，常用以下兩法：

小室法又稱濾膜小室法，采用特殊的小盒裝置，盒中以一片3～5μm孔徑的微孔濾膜將盒分為上下兩小室。上室加受檢的白細胞懸液;下室加細菌菌體或其產物、酵母菌活化的血清等趨化因子。置37℃溫育數小時。上室中的中性粒細胞因受下室內趨化因子的招引，使細胞由濾膜微孔進入濾膜內，最后取濾膜，經固定、干燥、著染、脫色等步驟，將透明后的濾膜置油鏡下檢測細胞在膜內通過的距離，求其趨化單位。

2.瓊脂糖凝膠平板法將含小牛血清的1%瓊脂糖傾到在玻片或平皿中制成凝膠平板，繼而打孔，每三孔為一組，中央孔加細胞懸液，兩側孔分別加趨化因子或對照培養液，經37℃溫育2～3h后，用2%戊二醛固定，移去瓊脂糖層，經染色后，測量細胞運動的距離，按下式計算移動指數。

檢測原則是將受檢細胞懸液按一定比例混和，繼加活的白色念珠菌懸液，保溫生，加美藍溶液作活體染色，取樣涂片鏡檢。如胞內白色念珠菌呈藍色，表示該菌已被殺死，共計100200個細胞，分別求其吞噬率和殺菌率。

溶細胞法更能直接反映細胞殺菌的情況，將受檢的.細胞懸液與一定量已經新鮮人血清調理過的大腸桿菌或金黃色葡萄球菌懸液混合后，置37℃，每隔一定時間取定量培養物，稀釋后接種固體平板培養基，37℃培養18h后，計算菌落數，據以計算中性粒細胞的殺菌能力。

正常情況下，對大腸桿菌的殺菌率約為90%，對金黃色葡萄球菌的殺菌率約為85%.

在臨床常用的硝基四氮唑藍(nbt)還原試驗，本法用以檢測中性粒細胞的胞內殺菌能力，由于中性粒細胞在殺菌過程中能量消耗劇增，耗氧量亦隨之相應增加，磷酸己糖旁路代謝活力增強，葡萄糖6-磷酸氧化脫氫，此時加入nbt可接受所脫的氫，使原先呈淡黃包的nbt還原成點狀或塊狀甲朊顆粒并沉積在胞漿內。

近此年來還采用了新穎的化學發光法，中性粒細胞在吞噬經調理的金黃色葡萄球菌過程中，伴有化學發光的產生，故可用化學發光儀測定中性粒細胞的吞噬功能及其代謝活性。實驗證明全血化學發光試驗可同時獲得兩種信息，即中性粒細胞的吞噬功能、代謝活性及受檢血清的調理功能。由于中性粒細胞的氧代謝活性與對細胞的吞噬率密切相關，殺菌能力與發光強度相平行，因此化學發光法可檢測細胞殺菌功能。因此吞噬細胞化學發光測定法可用以研究中性粒細胞的吞噬功能，代謝活性和血清調理功能，它可在生理溫度和中性環境下測定，能較好地反映生理條件下吞噬細胞的功能，具有準確靈敏、樣品用量少，簡便快速等優點。其敏感性高于nbt還原試驗。

正常小鼠肝中枯否細胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬細胞約吞噬清除10%炭粒，據此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液)，間隔一定時間反復取靜脈血，測定血中炭粒的濃度，根據血流中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細胞的功能。

(二)吞噬功能的檢測

巨噬細胞具有較強的吞噬功能，實驗室常用比細菌大的細胞性抗原作為被吞噬顆粒，如雞紅細胞。其檢測原理是將受檢細胞與適量的顆?？乖旌虾?，置37℃保溫0.5～1h，其間時加振搖，最后離心取測定細胞制成涂片，染色鏡檢，分別計數出吞噬百分比和吞噬指數。各實驗室應根據自己的條件建立正常參考值。

(三)巨噬細胞溶酶體酶的測定

巨噬細胞富含溶酶體酶，如酸性磷酸酶、非特異性酯酶、溶菌酶等，測定這些酶的活性也是衡量巨噬細胞功能的實用指標之一。

1.酸磷酸酶的測定

(1)硝酸鉛法：本法優點是用普通試劑，價格便宜，一般實驗室均有條件做，封片后可較長時間保存，并可用電子顯微鏡研究觀察細胞的超微結構。缺點是細胞必需固定，而且固定條件要求嚴格，如處理不當酶活性易消失，反應步驟也較多。

該法基本原理是在適當的酶性條件下，巨噬細胞內的酸性磷酸酶能使β甘油磷酸鈉水解成磷酸鹽后，后者與硝酸鉛反應產生磷酸鉛，而磷酸鉛再與硫酸銨反應則形成黑色硫化鉛，沉積在胞漿內酸所在處，顯示棕黑色顆粒。酶活性強弱可根據顆粒的數量和粗細不同而分級判斷，顆粒數量少則細的為+，顆粒多而粗的為++，顆粒很多且很粗的為+++。

(2)偶氮法：本法操作簡便，反應液中的底物α-萘磷酸鈉被酸性磷酸酶分解后，形成萘酚和磷酸鹽，而萘酚結構中的羥基(-oh)鄰近的活潑碳原子，立即與偶氮染料起反應，而產生鮮艷的棕色沉積在酶所在處，缺點是封片后保存時間短。

2.非特異性酶的測定該酶比較穩定，酶活性喪失較慢，細胞經涂片干燥，置室溫至少可保存半天至一天，因此特別有利于臨床檢驗室采用。

常用α-萘醋酸法，該酶可將-萘醋酸分解成萘酚和醋酸，萘酚迅速與偶染料結合，形成有色反應物而沉積。

(四)巨噬細胞促凝血活性測定

激活巨噬細胞可產生一種與膜結合的凝血活性因子，加速正常血漿的凝固，為此取已經37℃預溫的正常兔血漿和cac12混合液，加入經粘附單層巨噬細胞的試管中，移置37℃，即時記錄血漿凝固時間。實驗證明當巨噬細胞與lps、腫瘤相關抗原或hbsag等溫育后，可見血漿凝固時間明顯縮短。本法穩定方便，也是檢測不同疾病患者巨噬細胞功能的指標之一。

(五)巨噬細胞表面受體的檢測

成熟的巨噬細胞表面具有fc受體和c3b受體，這些受體能識別經igg和c3b調理的顆粒，并迅速與之結合，促使細胞對相應顆粒的吞噬，為此檢測這些受體可間接判斷巨噬細胞的功能。常用抗羊紅細胞致敏的羊紅細胞懸液作指示物進行ea花環試驗，也可用抗原(e)抗體(a)補體(c)復合物作eac花環試驗。由于操作繁鎖，現僅供研究用。

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